Mit Ezio reisen wir natürlich zurück nach Italien und dürfen Städte wie Florenz oder Venedig unsicher machen. Mit dem Gedanken nach Rache im Hinterkopf macht der  junge Ezio sich auf den Weg diejenigen zu finden, die für den Tod und den Verrat an seiner Familie verantwortlich sind. Doch nicht nur Ezio lernt auf seiner Reise immer mehr dazu, auch Desmond erlernt durch den Sicker-Effekt die Fähigkeiten der Assassinen in der realen Welt. Diese braucht er auch, wenn er gegen die Templer eine Chance haben möchte.